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液相色譜儀HPLC法測(cè)定蛋黃中膽固醇含量
更新時(shí)間:2016-01-11   點(diǎn)擊次數(shù):3273次

 雞蛋營養(yǎng)豐富,含有蛋白質(zhì)、脂肪、膽固醇、卵磷脂、維生素、鐵、鈣、鉀等人體需要的礦物質(zhì)。膽固醇又稱膽甾醇。一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物。早在18世紀(jì)人們已從膽石中發(fā)現(xiàn)了膽固醇,1816年化學(xué)家本歇爾將這種具脂類性質(zhì)的物質(zhì)命名為膽固醇。膽 固醇廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi),尤以腦及神經(jīng)組織中zui為豐富,在腎、脾、皮膚、肝和膽汁中含量也高。其溶解性與脂肪類似,不溶于水,易溶于乙mi、氯仿等溶劑。膽 固醇是動(dòng)物組織細(xì)胞所*的重要物質(zhì),它不僅參與形成細(xì)胞膜,而且是合成膽汁酸,維生素D以及甾體激素的原料然而有研究人員提出,雞蛋膽固醇含量相對(duì)較高,過多攝入雞蛋會(huì)導(dǎo)致人體血清膽固醇增高,引發(fā)心血管疾病。由此我們對(duì)雞蛋中膽固醇含量進(jìn)行研究,探索快速檢測(cè)雞蛋中膽固醇含量的方法。

 實(shí)驗(yàn)部分

1.儀器與試劑

   儀器:Waters液相色譜儀waters 2695配置高壓泵,紫外檢測(cè)器),萬分之一梅特勒電子天平,渦旋混合儀,離心機(jī),超聲波清洗器 

   試劑: 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品,甲醇(色譜純),異丙醇(分析純),**(分析純),石油醚(分析純),無水乙醇(分析純),市售普通雞蛋

2. 色譜條件

    色譜柱:C18色譜柱 150mm×4.6mm×5μm;流動(dòng)相:甲醇-異丙醇(4:1,v/v;流速:1.0mL/min;溫度:25 進(jìn)樣量:20μL;檢測(cè)波長(zhǎng):205nm

3 .標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

    準(zhǔn)確稱取膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品25mg,于25ml容量瓶中,用無水乙醇溶解稀釋至刻度,得膽固醇儲(chǔ)備液(1.0g/L)。
    取膽固醇儲(chǔ)備液0.00.5, 1.02.0,4.0,6.08.0,1.0ml10ml容量瓶中,無水乙醇稀釋定容,的濃度為00.05 ,0.1,0.20.4,0.6,0.8,1.0g/L 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4 .樣品前處理
  取雞蛋稱重,除去蛋清,準(zhǔn)確稱取蛋黃重量。取蛋黃樣品2.0g,用20ml高純水溶解稀釋混勻,得蛋黃稀釋液(0.1g/ml)。取蛋黃稀釋液1.0ml于 具塞離心管中,加無水乙醇1.0ml,渦旋混勻,加乙mi3.0ml,石油醚3.0ml,渦旋混合,將混合液離心(4000r/min),使液體分層,取上 層有機(jī)相;下層再加入2.0ml**和2.0ml石油醚進(jìn)行萃取,合并上層萃取液,氮吹儀吹干(溫度<30℃),0.5ml乙醇溶解,經(jīng) 0.45μm有機(jī)微孔濾膜過濾后,上機(jī)檢測(cè)。

5.結(jié)果與討論

6.標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

    配制好的系列膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液,在設(shè)定好的色譜條件下進(jìn)行色譜分析,進(jìn)樣量為20μL,保留時(shí)間為6.72min,每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣三次,以峰高HmAU)為縱坐標(biāo),膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度C(g/L)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,線性回歸方程為H=76.45C-0.052,相關(guān)系數(shù)r=0.9991。

7.蛋黃中膽固醇含量

    將處理好的蛋黃樣品取樣測(cè)試,進(jìn)樣量20μL,在6.72min膽固醇被洗脫出來,蛋黃其他組分能與膽固醇有效分離,不干擾膽固醇的測(cè)定。由膽固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算膽固醇含量。(液相圖譜件見圖1,結(jié)果見表1

蛋黃膽固醇液相圖譜



蛋黃膽固醇含量

樣品編號(hào)

雞蛋重量g

蛋黃重量g

膽固醇含量(mg/g蛋黃)

膽固醇含量(mg/個(gè)蛋黃)

1

60.23

15.76

12.11

190.85

2

58.46

14.98

11.34

169.87

3

59.47

15.31

10.76

164.74

8.結(jié)論

    本文建立了利用反相液相色譜法快速測(cè)定蛋黃中膽固醇的方法,樣品無需皂化處理,直接用乙mi和石油醚進(jìn)行萃取,大大節(jié)約了樣品前處理時(shí)間,操作快速簡(jiǎn)便, 具有良好的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性,可做為測(cè)定蛋黃中膽固醇含量的有效方法。另膽固醇主要來自人體自身合成,食物中的膽固醇是次要補(bǔ)充。一般常人每日從食物中攝取 膽固醇200mg,即可滿足身體需要。專家建議每天攝入50mg-300mg膽固醇為佳。

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