安捷倫氣相色譜儀測(cè)定魚(yú)油中DHA和EPA的含量-深海魚(yú)油是指從深海中魚(yú)類(lèi)動(dòng)物體中提煉出來(lái)的不飽和脂肪成分，分別為EPA和DHA。魚(yú)油是指富含EPA(二十碳五烯酸）、DHA(二十二碳六烯酸）的魚(yú)體內(nèi)的油脂。普通魚(yú)體內(nèi)含EPA、DHA數(shù)量極微，只有寒冷地區(qū)深海里的魚(yú)，如三文魚(yú)、沙丁魚(yú)等體內(nèi)EPA、DHA含量*，而且陸地其他動(dòng)物體內(nèi)幾乎不含EPA、DHA。因此選用深海魚(yú)來(lái)提練EPA及DHA。
作用功效
1、調(diào)節(jié)血脂，清理血栓，防止血液凝固，預(yù)防腦血栓、腦溢血及中風(fēng)。
2、預(yù)防關(guān)節(jié)炎、緩解痛風(fēng)、哮喘，暫時(shí)緩解由關(guān)節(jié)炎引起的腫痛。
3、預(yù)防老年癡呆癥、營(yíng)養(yǎng)大腦、改善記憶。
4、改善視力、防治老花眼。
5、維護(hù)視網(wǎng)膜。
隨著消費(fèi)者需求量的不斷增加，市場(chǎng)上魚(yú)油制品層出不窮，但其有效成分EPA、DHA含量存在較大差異，因此，建立魚(yú)油制品中EPA與DHA的快速檢測(cè)方法，識(shí)別假冒產(chǎn)品，具有一定的意義。
一、實(shí)驗(yàn)部分
1.1
儀器及材料
安捷倫氣相色譜儀7820A（附氫火焰離子化檢測(cè)器）
1.2 色譜條件
色譜柱：Alltech EC-1000，30m×0.25mm×0.25μm；色譜柱溫度：198 ℃恒溫3 min，以10 ℃/min升溫至248 ℃，維持12 min；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；FID檢測(cè)器溫度：280 ℃；進(jìn)樣方式：分流，分流比30:1；進(jìn)樣量：1μL；載氣：氮?dú)狻?nbsp;
1.3 試劑
EPA/DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99％)，內(nèi)標(biāo)物——二十三碳酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99％)，均購(gòu)于美國(guó)SIGMA公司。2 mol/L氫氧化鉀－甲醇溶液。正庚烷、甲醇均為色譜純、氫氧化鉀為分析純。
1.4 操作步驟
1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備
DHA甲酯、EPA甲酯、二十三碳酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣 品：均配制成濃度為1.0 mg/mL的正庚烷溶液。 1.4.2 樣品制備[4] 稱(chēng)取試樣500 mg至具塞試管中，用移液管移取5 mL正庚烷溶解試樣，用移液管移取2 mL氫氧化鉀—甲醇溶液，蓋上玻璃蓋猛烈振搖1 min后，加蒸餾水至試管頸部，置于離心機(jī)以3000 r/min離心5 min，移取2 mL上清液至具塞試管，加入2 mL內(nèi)標(biāo)液，定容置10 mL，供上機(jī)測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間定性，由相對(duì)質(zhì)量校正因子來(lái)定量計(jì)算魚(yú)油樣品中的EPA和DHA含量。
1.4.2 樣品制備
稱(chēng)取試樣500 mg至具塞試管中，用移液管移取5 mL正庚烷溶解試樣，用移液管移取2 mL氫氧化鉀—甲醇溶液，蓋上玻璃蓋猛烈振搖1 min后，加蒸餾水至試管頸部，置于離心機(jī)以3000 r/min離心5 min，移取2 mL上清液至具塞試管，加入2 mL內(nèi)標(biāo)液，定容置10 mL，供上機(jī)測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間定性，由相對(duì)質(zhì)量校正因子來(lái)定量計(jì)算魚(yú)油樣品中的EPA和DHA含量。
1.4.3 結(jié)果計(jì)算
對(duì)所得的色譜圖，以?xún)?nèi)標(biāo)法進(jìn)行結(jié)果計(jì)算：
式中：AX—EPA、DHA的峰面積；AIS—內(nèi)標(biāo)峰的峰面積；
FX—EPA或DHA的校正因子；WIS—樣品中內(nèi)標(biāo)物的加入量(mg)；WS—樣品量(mg)；FW—EPA、DHA甲酯換算成EPA、DHA的換算因子，EPA=1.105，DHA＝1.096；25—樣品前處理過(guò)程中稀釋倍數(shù)。
二、安捷倫氣相色譜儀測(cè)定魚(yú)油中DHA和EPA的含量結(jié)果討論
2.1 樣品前處理方法的選擇
油脂中脂肪酸的測(cè)定通常需要甲酯化處理，常用的甲酯化方法有三氟化朋法、*基氫氧化硫（TMSH）法、甲醇鉀法、重氮甲完、鹽酸/甲醇、硫酸/甲醇和氫氧化四甲胺/甲醇等[5]。本文主要用氫氧化鉀/甲醇法，針對(duì)性檢測(cè)魚(yú)油制品中的EPA與DHA，該法具有操作簡(jiǎn)單、快捷的特點(diǎn)。 2.2 EPA甲酯和DHA甲酯的色譜分離
深海魚(yú)油樣品加入內(nèi)標(biāo)C23:0甲酯的氣相色譜圖見(jiàn)圖1
由圖1可見(jiàn)，EPA甲酯、DHA甲酯和C23:0甲酯 的保留時(shí)間分別為12.898 min、18.052 min、14.785 min，三種脂肪酸甲酯分離良好，并且其余組分不干擾測(cè)定。
2.3 校正因子的測(cè)定
采用內(nèi)標(biāo)法測(cè)得EPA甲酯和DHA甲酯對(duì)內(nèi)標(biāo)C23:0甲酯的相對(duì)質(zhì)量校正因子，結(jié)果見(jiàn)表1。
2.4 方法精密度
取同一深海魚(yú)油樣品5份，按1.4.2所述步驟測(cè)定，1.4.3定量分析，得EPA和DHA的精密度，結(jié)果見(jiàn)表2。
2.5 EPA和DHA的回收率
于100 mg的深海魚(yú)油樣品中分別加入一定量的EPA和DHA，按1.4.2所述步驟測(cè)定，1.4.3定量分析，進(jìn)樣次數(shù)為5次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。
2.6 樣品測(cè)定
對(duì)3種市場(chǎng)上銷(xiāo)售的深海魚(yú)油樣品進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，樣品1中EPA、DHA含量比標(biāo)稱(chēng)數(shù)據(jù)明顯偏低，樣品2、3中EPA、DHA含量與標(biāo)稱(chēng)數(shù)據(jù)基本吻合。
三、安捷倫氣相色譜儀測(cè)定魚(yú)油中DHA和EPA的含量結(jié)論
內(nèi)標(biāo)法是氣相色譜當(dāng)中一種比較理想的定量方法，它要求內(nèi)標(biāo)物與被分析物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)要相似，而對(duì)操作條件要求不高，內(nèi)標(biāo)法是測(cè)定脂肪酸含量的方便準(zhǔn)確的定量方法。一般通常使用C17:0等單飽和脂肪酸甲酯作為測(cè)定脂肪酸的內(nèi)標(biāo)物，其保留時(shí)間與EPA和DHA的保留時(shí)間相差較大。使用二十三碳飽和脂肪酸甲酯作為測(cè)定EPA、DHA的內(nèi)標(biāo)物，其性質(zhì)和EPA、DHA相近，保留時(shí)間位于兩者之間，并且通過(guò)不同魚(yú)油樣品的分析，試樣中*不含有C23:0，不受試樣中其它組分峰的影響，能滿(mǎn)足準(zhǔn)確 測(cè)定EPA和DHA的要求。
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