肉類脂肪是人們攝入脂肪 ,特別是飽和脂肪酸的主要來源。脂肪決定肉類食用品質的重要因素,脂肪的多少直接影響肉的多汁性和嫩度 ,脂肪酸的組成則是決定肉類不同風味的重要因子。近年來,越來越多的研究證明 ,各種癌癥特別是冠心病發(fā)病率的增高與日糧攝入的脂肪酸組成高度相關因此,對豬肉脂肪酸組成的測定方法的探討也日益為人們所重視。油脂中的脂肪酸組分一般采用氣相色譜法進行分離和測定,脂肪酸一般是以甘油酯形式存在,沸點較高,可利用酯交換先將油脂中的脂肪酸甲酯化后再進行氣相色譜測定。
實驗部分
一、儀器和試劑
日本島津GC—14C氣相色譜儀,F(xiàn)ID檢測器,N2000色譜數(shù)據(jù)工作站。石油醚(AR沸程30~60)、苯(AR)、無水甲醇(AR)、氫氧化鉀(AR)、脂肪酸甲酯標準品(由SIGMA公司提供)。
1.1色譜條件
30m×0.32mmAT.FFAP石英毛細管柱,柱溫1900C,檢測器溫度2900C,進樣器溫度2900C,高純氮氣60ml/min,尾吹35
ml/min,氫氣50 ml/min,空氣500ml/min。
1.2標準曲線制備
稱取各脂肪酸甲酯標準品適量,分別用無水甲醇配制成2000ug/ml的標準貯備液。測樣品時分別移取各貯備液1、2、4ml置于10ml容量瓶, 用無水甲醇稀釋定容,配制成200、400、800ug/ml的混合標準系列,各取2ul注入氣相色譜儀,進行兩次平行測定,以保留時間定性,峰面積定 量,以峰面積對應脂肪酸濃度(ug/ml)繪制標準曲線。
1.3實驗材料
市售豬肉,貯藏于低溫冰箱中待測定用。
1.4樣品處理
將5g肉樣從冰箱中取出解凍,剪碎置于培養(yǎng)皿中,于30~600C進行真空干燥約8h,取出研碎后稱取約0.5g干樣,置于10 ml具塞試管中,加2ml苯與石油醚(1:1)的混合液,密閉浸提24h后加2ml氫氧化鉀—甲醇溶液(0.4mol/L)進行快速甲酯化,搖勻靜置分層 后沿試管壁加入蒸餾水使甲醇溶液層上升至試管上部,放置至澄清,取上清夜經(jīng)0.45um濾膜過濾,濾液供氣相色譜分析。
1.5樣品測定
取2ul樣品濾液,同標準一樣測定,由標準曲線查得各脂肪酸的濃度。
二、結果與討論
2.1定性及定量分析
驗采用脂肪酸甲酯標準作保留時間定性及峰面積定量分析,采取面積校正歸一法可測定各脂肪酸的相對百分含量,采取面積外標法可測得各脂肪酸的實際含量。
時間(time)
時間(time)
2.2樣品脂肪酸組成的測定結果
各脂肪酸的百分含量系占樣品脂肪酸總量的百分比
表1列出了樣品中8種主要脂肪酸的測定結果
峰號 | 脂肪酸名稱 | 碳數(shù)及不飽和數(shù) | 含量(ug/ml) | 百分含量 |
| 豆蔻酸 | C14:0 | 0.1887 | 1.0323 |
1 | 棕櫚酸 | C16:0 | 4.5656 | 24.9701 |
2 | 棕櫚油酸 | C16:1 | 0.5665 | 3.0985 |
3 | 硬脂酸 | C18:0 | 2.8662 | 15.4573 |
4 | 油酸 | C18:1 | 7.1844 | 39.2929 |
5 | 亞油酸 | C18:2 | 2.7865 | 15.2373 |
6 | 亞麻酸 | C18:3 | 0.1311 | 0.7173 |
7 | 花生酸 | C20:0 | 0.0355 | 0.1944 |
8 |
2.3線性關系
各取2ul已經(jīng)配制好的脂肪酸甲酯混合標準系列工作液,在擬定的色譜條件下測定,可測得各組分各濃度時的相應峰面積,以濃度為縱坐標, 峰面積為橫坐標,制作標準曲線及進行線性回歸,所得回歸方程均呈良好的線性關系,豆蔻酸回歸系數(shù)R=0.9998,棕櫚酸回歸系數(shù)R=0.9999,棕櫚 油酸回歸系數(shù)R=0.9999,硬脂酸回歸系數(shù)R=0.9998,油酸回歸系數(shù)R=0.9998,亞油酸回歸系數(shù)R=0.9999,亞麻酸回歸系數(shù) R=0.9999,花生酸回歸系數(shù)R=0.9999
2.4方法的精密度(重復性)
選用豬肉,連續(xù)用本方法平行測定6次,測定結果(百分含量)見表2
脂肪酸 | 豆蔻酸 | 棕櫚酸 | 棕櫚油酸 | 硬脂酸 | 油酸 | 亞油酸 | 亞麻酸 | 花生酸 | |
編號 | |||||||||
1 | 0.9 | 25.1 | 3.3 | 15.35 | 39.86 | 15.11 | 0.75 | 0.23 | |
2 | 0.85 | 25.15 | 3.2 | 15.5 | 39.56 | 15.33 | 0.79 | 0.25 | |
3 | 0.89 | 24.99 | 3.15 | 15.4 | 39.36 | 15.49 | 0.82 | 0.19 | |
4 | 0.91 | 25.2 | 3.17 | 15.6 | 39.68 | 15.22 | 0.75 | 0.2 | |
5 | 0.86 | 25.24 | 3.27 | 15.29 | 39.29 | 15.56 | 0.73 | 0.26 | |
6 | 0.88 | 25.18 | 3.32 | 15.55 | 39.78 | 15.78 | 0.77 | 0.22 | |
均值 | 0.88 | 25.14 | 3.24 | 15.45 | 39.59 | 15.42 | 0.77 | 0.23 | |
標準偏差 | 0.02 | 0.09 | 0.071 | 0.12 | 0.23 | 0.24 | 0.03 | 0.03 | |
相對標準偏差 | 2.27% | 0.36% | 2.19% | 0.78% | 0.58% | 1.56% | 3.90% | 2.09% |
由表2結果可看出,相對標準偏差在
0.36~3.90 之間,符合色譜定量分析的允許標準偏差范圍,結果表明,本方法有較好的精密度和重復性。
2.5方法回收實驗
對豬肉中分別加入已知量的脂肪酸混合溶液,按2.5的樣品處理方法,經(jīng)處理后測定和計算加入的脂肪酸含量,樣品中脂肪酸的平均回收率(n=6)分別 為:豆蔻酸100.33 %、棕櫚酸100.20%、棕櫚油酸 100.24%、硬脂酸99.96% 、油酸100.22%、亞油酸100.36% 、亞麻酸100.18%、花生酸99.88% 。
三、總結
由測定結果可以看出,本方法能準確地分離和測定豬肉的主要脂肪酸,有較好的精密度和較高的可靠性。